Uso del azul brillante de cresilo en la selección de ovocitos competentes para la producción in vitro de embriones
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Date
2019
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Abstract
The objective was to evaluate the Brilliant Cresyl Blue (BCB) in the selection of oocytes for the production of embryos in vitro (PIV). Three treatments were evaluated. G1 = Witness without BCB exposure; G2 = staining positive oocytes (BCB +) and G3 = staining negative oocytes (BCB-). Morphometry, maturation (IVM), meiotic configuration, cleavage and embryos were determined. 2,340 cumulus oocyte complexes (COCs) were obtained, classified as suitable and not suitable for IVP. The 2/3 parts were exposed for 90 min. To BCB and the rest incubated for 90 min in H-SOF. 25% of COCs from each group were taken to assess the morphometry. The remaining 75% was placed in maturing medium for 24h. After IVM, 25% of COCs were used for morphometry and meiotic progression. The remaining 50% was in vitro fertilized (IVF) and cultivated. Cleavage was evaluated 48h after IVF and embryos on day 8. 62.3% of G2 oocytes were BCB + and had a larger diameter before (135, 9 μm) and after (134, 8 μm) of IVM. (P <0.05) vs group 3 BCB- (128, 1 and 127, 6 μm) and the Witness (129, 0 and 128, 2 μm). Maturation and meiotic configuration were not different between groups (P> 0.05). Cleavage was higher (P <0.05) in the Control (43.4%) than the BCB + group (33.5%). Finally, the global percentage of embryos was higher in BCB + (52.6%) than the Controlling (32.6%) and BCB- (33.5%). It is concluded that the BCB allowed to select oocytes with a larger diameter, although it did not allow to increase the percentage of maturation and cleavage, it contributed to improving the overall percentage of embryos obtained in vitro.
Resumen
El objetivo fue evaluar el Azul Brillante de Cresilo (BCB) en la selección de ovocitos para la producción de embriones in vitro (PIV). Se valoraron tres tratamientos. G1= Testigo sin exposición al BCB; G2= ovocitos positivos a la tinción (BCB+) y G3= ovocitos negativos a la tinción (BCB-). Se determinó morfometría, maduración (MIV), configuración meiótica, clivaje y embriones. Se obtuvieron 2.340 complejos cúmulus ovocitos (COCs), clasificados en aptos y no aptos para la PIV. Las 2/3 partes fueron expuestos por 90 min., al BCB y los restantes incubados por 90 min en H-SOF. El 25% de COCs de cada grupo fue tomado para valorar la morfometría. El 75% restante se colocó en medio de maduración por 24h. Luego de la MIV un 25% de COCs se utilizó para la morfometría y la progresión meiótica. El 50% restante fue fertilizado in vitro (FIV) y cultivado. El clivaje se evaluó 48h después de la FIV y los embriones al día 8. El 62, 3% de ovocitos de G2 fueron BCB+ y presentaron un diámetro mayor antes (135, 9 μm) y después (134, 8 μm) de la MIV (P< 0, 05) vs el grupo 3 BCB-(128, 1 y 127, 6 μm) y el Testigo (129, 0 y 128, 2 μm). La maduración y la configuración meiótica no fueron diferentes entre grupos (P> 0, 05). El clivaje fue mayor (P< 0, 05) en el Testigo (43, 4%) que el grupo BCB+(33, 5%). Finalmente, el porcentaje global de embriones fue mayor en BCB+(52, 6%) que el Testigo (32, 6%) y BCB-(33, 5%). Se concluye que el BCB permitió seleccionar ovocitos con mayor diámetro, a pesar de que no permitió aumentar el porcentaje de maduración y clivaje, contribuyó a mejorar el porcentaje global de embriones obtenidos in vitro.
Keywords
Ovocitos, Azul Brillante de Cresilo, Embriones, In vitro, Maduración