Criopreservación de espermatozoides de cobayo (Cavia porcellus) por congelación convencional lenta y ultrarrápida
Loading...
Date
2024-08-05
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Universidad de Cuenca
Abstract
The guinea pig spermatozoa are characterized by high head dimensions that can influence
cryosurvival depending on the freezing method used. This research evaluated the cryogenic
response of epididymal guinea pig spermatozoa cryopreserved by conventional freezing (CF) and
ultra-rapid freezing (URF). Forty testicles (left and right) were recovered from twenty healthy, adult
and fertile guinea pigs through orchiectomy. The sperm samples from the right testicles were
conventionally frozen using glycerol (3%), dimethylformamide (3%), bovine serum albumin (1%)
and exposed in 0.25 ml straws to static liquid nitrogen (LN2) vapors. In contrast, the samples from
the left testicles were ultra-rapidly frozen using sucrose (100 mM), bovine serum albumin (1%)
and by directly plunging 20 μl droplets into LN2. The results demonstrated that all kinematic
parameters, such as motilities, velocities, and progression ratio parameters, drastically decreased
after both cryopreservation methods compared to their pre-freezing values (P < 0.05). Before and
after cryopreservation, the URF samples exhibited higher total motility (TM) than the CF samples
(P < 0.05). The parameters of the progressive motility, curvilinear and straight-line velocities with
rapid-progressive trajectory, amplitude of lateral head displacement (ALH), plasma membrane
and acrosome integrity (IPIA), and DNA integrity were higher (P < 0.05) in the ultra-rapidly frozen
samples than in the conventionally frozen samples. However, no significant differences (P > 0.05)
were observed in the morphometric dimensions of the head, neither before nor after CF and URF.
In conclusion, ultrafast freezing resulted in higher sperm cryosurvival based on better motilities,
velocities, membrane integrity and DNA integrity compared to conventional freezing.
Resumen
El espermatozoide de cobayo se caracteriza por tener grandes dimensiones de la cabeza que
puede influir en la criosupervivencia según el método de congelación utilizado. Esta investigación
evaluó la respuesta criogénica de los espermatozoides epididimarios de cobayo criopreservados
mediante congelación convencional (CC) y ultrarrápida (CU). Mediante orquiectomía, se
recuperaron 40 testículos (izquierdos y derechos) provenientes de 20 cobayos adultos
clínicamente sanos. Las muestras espermáticas de los testículos derechos fueron congeladas
convencionalmente usando glicerol (3%), dimetilformamida (3%), albumina sérica bovina (1%) y
exponiendo las muestras en pajuelas de 0,25 ml a vapores de nitrógeno líquido (LN2) estático.
Mientras que, las muestras de los testículos izquierdos fueron congeladas ultrarrápidamente
usando sacarosa (100 mM), albumina sérica bovina (1%) y sumergiendo gotas de 20 μl
directamente en LN2. Los resultados demostraron una baja respuesta criogénica dado que todos
los parámetros cinemáticos como las motilidades, velocidades y parámetros de relación de
progresión, disminuyeron drásticamente luego de ambos métodos de criopreservación en
comparación con sus valores pre-congelación (P < 0,05). Antes y después de la criopreservación,
las muestras sometidas a congelación CU produjo una mayor motilidad total (MT) a comparación
de aquellas muestras sometidas a congelación CC (P < 0,05). Los parámetros de motilidad
progresiva, velocidades curvilínea y rectilínea con trayectoria rápida-progresiva, la amplitud del
desplazamiento lateral de la cabeza (ALH), la integridad de las membranas plasmática y
acrosomal (IPIA), y la integridad de ADN fueron mayores (P < 0,05) en las muestras congeladas
ultrarrápidamente que en las muestras congeladas convencionalmente. No obstante, no se
evidenció diferencias significativas (P > 0,05) en las dimensiones morfométricas de la cabeza, ni
antes, ni después de la congelación CC y CU. En conclusión, la congelación ultrarrápida dio lugar
a una mayor criosupervivencia espermática basada en mejores motilidades, velocidades,
integridad de membrana e integridad de ADN en comparación con la congelación convencional.
Keywords
Medicina Veterinaria, Espermatozoides, Cobayos, Congelación convencional
Citation
Código de tesis
TV;510
Código de tesis
Grado Académico
Médico Veterinario