Publication: Effect of L-carnitine in a skimmed milk based-diluent on membranes preservation and kinetic activity of ram sperm under chilled conditions
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Date
2019
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Volume Title
Publisher
Asociación Interprofesional para el Desarrollo Agrario
Abstract
The synergic effect of L-carnitine (LC) and skimmed milk base-extender (UHT) on the kinetic parameters and membranes integrity of cold-stored ram sperm was evaluated. For this purpose, twelve pools of thirty-six semen ejaculates that were collected with artificial vagina from twelve Merino rams were used. After initial evaluation, the semen was divided into 6 aliquots enough to diluted with UHT-extender (control) and 1mM (UHT-LC1), 2.5mM (UHT-LC2.5), 5mM (UHT-LC5), 7,5mM (UHT-LC7.5) and 10mM (UHT-LC10) of LC, respectively, at 200 x 106 cells/ml concentration. Semen samples were cold-stored (5ºC) up to 96 h. Kinetic variables and membranes integrity were assessed by CASA system (SCA) and triple fluorescence association test (IP/PNA-FITC/Mitotracker green). An ANOVA-one way and Bonferroni´s test were used to evaluated effects of LC doses. Overall, the total motility (TM, %), straight line velocity (VSL, μm/s) and total sperm with plasma and acrosome membranes integrity and high mitochondrial function (IPIAHM, %) were greater with all doses of LC (1 to 10 mM) than control group. Also, the UHT-LC5 group provided better values than others LC groups according to motilities. In conclusion, LC improves kinetic vigor and provides an antioxidant protective effect to sperm membranes of cold-stored ram when added to skimmed milk based-diluent
Description
Se evaluó el efecto sinérgico de la L-carnitina (LC) y el extensor de base de leche desnatada (UHT) sobre los parámetros cinéticos y la integridad de las membranas de los espermatozoides almacenados en frío. Para este propósito, se utilizaron doce grupos de treinta y seis eyaculados de semen que fueron recolectados con vagina artificial de doce carneros Merino. Después de la evaluación inicial, el semen se dividió en 6 partes alícuotas suficientes para diluirlo con el extensor UHT (control) y 1 mM (UHT-LC1), 2,5 mM (UHT-LC2.5), 5 mM (UHT-LC5), 7,5 mM ( UHT-LC7.5) y 10 mM (UHT-LC10) de LC, respectivamente, a 200 x 106 células / ml de concentración. Las muestras de semen se almacenaron en frío (5ºC) hasta 96 h. Las variables cinéticas y la integridad de las membranas se evaluaron mediante el sistema CASA (SCA) y la prueba de asociación de triple fluorescencia (IP / PNA-FITC / Mitotracker verde). Se usaron ANOVA-one way y la prueba de Bonferroni para evaluar los efectos de las dosis de LC. En general, la motilidad total (TM,%), la velocidad de la línea recta (VSL, μm / s) y el esperma total con integridad de membranas de plasma y acrosoma y alta función mitocondrial (IPIAHM,%) fueron mayores con todas las dosis de LC (1 a 10 mM) que el grupo control. Además, el grupo UHT-LC5 proporcionó mejores valores que otros grupos LC de acuerdo con la motilidad. En conclusión, la LC mejora el vigor cinético y proporciona un efecto protector antioxidante a las membranas de esperma de carnero almacenado en frío cuando se agrega a un diluyente a base de leche desnatada
Keywords
L-Carnitine, Chilled, Skimmed Milk, Ram