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Adición de fluido folicular en la maduración de ovocitos de cerdas prepúberes
(Asociación Latinoamericana de Producción Animal, 2018) Argudo Garzon, Daniel Ernesto; Borja Tello, Diana Carolina; Wilches Correa, Veronica Elizabeth; Agurto Miranda, Valewska Andrea; Ayala Guanga, Luis Eduardo; Perea Ganchou, Fernando Pedro; Méndez Álvarez, María Silvana; Soria Parra, Manuel Elías; Argudo Garzon, Daniel Ernesto
La producción in vitro de embriones en los porcinos y otras especies de interés zootécnico es indispensable para el desarrollo productivo e investigativo. Diariamente se faenan cientos de cerdos en el camal municipal de Cuenca, Ecuador; donde sería posible rescatar material genético (complejos cúmulos ovocitos; Coc´s) valioso si se recuperan los ovarios de las cerdas; sin embargo, estos animales son beneficiados antes de la pubertad (<5 meses de edad) en cuyo caso la maduración de los Coc´s es deficiente. Se estableció como objetivo del estudio determinar el efecto del fluido folicular porcino (FFP) en maduración de Coc´s de cerdas prepúberes. Se obtuvieron ovarios (n=30) de cerdas faenadas en el camal municipal de Cuenca, los cuales fueron transportados al Laboratorio de Biotecnología de la Reproducción Animal de la Universidad de Cuenca, Ecuador. Inmediatamente se puncionaron los folículos antrales de 2-8mm con una aguja 18x1.5 pulgadas acoplada a una jeringa. El líquido folicular resultante fue filtrado para posteriormente realizar la búsqueda y recuperación de los Coc´s. Adicionalmente, se recuperó FFP, que fue centrifugado a 2000g x 20 minutos, esterilizado por doble filtración con filtros de jeringa estériles de 0.22µm y congelado hasta su uso. Para la maduración, los Coc´s de excelente y buena calidad (n=245) se dividieron aleatoriamente en tres grupos a los que se adicion diferentes porcentajes de FFP: 0% (n=79) ,10% (n=94) y 20%(n=72). Los Coc´s fueron incubados por 48hs en medio de maduración compuesto por TCM199, suero fetal bovino, FSH-p, HCG, piruvato de sodio, L-glutamina, gentamicina y FFP en una estufa con 5% de CO2, 38.5°C y 90%rh. Luego de madurados, los Coc´s fueron denudados por pipeteo en una solución dehialuronidasa 0.1% (p/v), inmediatamente teñidos conHoechst 33342 y observados en un microscopio de fluorescencia. Aquellos que presentaron la expulsión del corpúsculo polar fueron consideraron maduros y el resultado se expresó en porcentaje. Se aplicó un análisis de varianza (ANOVA) seguido de un test de Tukey. El grupo de Coc´s que no fue suplementado con FFP (0%) tuvo menor tasa de maduración (21,33+1,4 %) que los grupos suplementados con 10 (51,53+3,4%) y 20 % (52,93+5,7%) (P<0.05). Se concluye que, irrespectivamente del porcentaje adicionado el FFP fue necesario para mejorar la maduración de Coc´s de cerdas prepúberes
Caracterización morfométrica de útero, ovarios y ovocitos de cobayas criollas (Cavia porcellus) de la sierra sur de Ecuador
(ALPA, 2018) Fernandez Jara, Adriana Estefania; Encalada Sinche, Tania Alexandra; Guaman Guallpa, Anabel Gabriela; Ayala Guanga, Luis Eduardo; Argudo Garzon, Daniel Ernesto; Rosales Jaramillo, Cornelio Alejandro; Perea Ganchou, Fernando Pedro; Fernandez Jara, Adriana Estefania
Los cuyes o cobayos son animales de gran interés productivo en la sierra ecuatoriana y en otros países andinos, debido a que constituyen una fuente alimenticia de alto valor nutritivo y de consumo tradicional; sin embargo, muchos aspectos morfológicos y fisiológicos de estos animales han sido poco estudiados. Se estableció como objetivo de este estudio caracterizar morfométricamente el útero, ovarios y ovocitos de cobayas (Cavia porcellus) nativas de la Sierra sur del Ecuador. Se utilizaron 18 cobayas primíparas de línea genética Azuay y Cañar, con un peso promedio 1002.7 ± 212.7 gramos, en buen estado de salud, que pertenecían a la Unidad de Producción de Cuyes de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad de Cuenca. Los animales fueron faenados siguiendo las normas de bioética y bienestar animal consideradas por la Organización Mundial para la Salud Animal. Luego de ser identificado y aislado el aparato reproductor de cada hembra, los ovarios fueron retirados y colocados en solución fisiológica a 37ºC, hasta ser pesados en una balanza analítica y medidos su largo y ancho con un calibrador metálico. Los úteros fueron removidos y separados del tejido circundante, e inmediatamente medidos los cuernos derecho e izquierdo, así como también el cuerpo y cuello uterino. Los ovocitos obtenidos (n=48) mediante la técnica de slicing (cortes múltiples sucesivos de la corteza ovárica) dentro de una placa de Petri con solución fisiológica, fueron identificados y lavados varias veces, y removidas las células de cumulo mediante pipeteo repetido en un medio con hialuronidasa al 0,1%. Luego fueron fotografiados y medidos con un software (AmScope V3.7) calibrado para realizar mediciones microscópicas. Los datos se analizaron con el programa estadístico SAS. El peso de los ovarios fue 77±27 miligramos (derecho 77,7; izquierdo 76,3), y su largo y ancho de 8,05±1,25 (derecho: 8,27; izquierdo: 7,83) y 5,27±1,14 mm (derecho: 5,38; izquierdo: 5,16) respectivamente. El cuerno derecho midió 7,97±1,74 cm y el izquierdo 7,85±1.75 cm; mientras que el cuerpo y el cuello uterino midieron 1,2±0,37 y 1,1±0,22 cm respectivamente. La zona pelucida de los ovocitos midió 12,1±2,5 mμ, mientras que su diámetro (sin zona pelucida) y volumen fueron de 75,6±8,2 μm y 234003,8±76547,1 μm3 respectivamente. Se concluye que el peso y las dimensiones de los ovarios derecho e izquierdo de cobayas nativas es similar. Asimismo, conocer las características morfológicas del aparato reproductivo de esta especie es de gran valor para comprender mejor los aspectos funcionales de la misma.
Comparison of characterization of fighting rooster (gallus gallus) semen ejaculates recovered by electroejaculation and dorsal massage techniques
(2021) Alvarado, Juan Carlo; Galarza Lucero, Diego Andrés; Moscoso Piedra, Andrés; Muñoz Verdugo, Marco Antonio; Argudo Garzon, Daniel Ernesto; Samaniego Campoverde, Jorge Xavier; Maldonado Cornejo, Manuel Esteban; Cabrera Córdova, Bolívar Santiago
Implementing alternatives methods to dorsal massage (e.g., electroejaculation) for recovering semen from fighting rooster, known to be very stressful due to its aggressiveness, has become a priority for breeders of this cock breed in Ecuador. Therefore, the objective of the present study was to evaluate two semen collection techniques in fighting roosters, one by electroejaculation (EE) and another by dorsal massage (DM) on seminal quality parameters. For this purpose, thirty attempts of semen recovery from six adult Spanish fighting roosters were carried out using DM (n = 12) and EE (n = 18). Electroejaculation was performed previous sedation, applying five stimulation cycles (of 2 s) generated from a handmade electroejaculation probe (9 to 12 V). The results showed that the EE produced lower response (P < 0.01) to semen ejaculation than the DM (44.4 % vs. 100.0 %, respectively). However, semen samples obtained by EE had better (P < 0.05) spermatic kinetic with greater values of straight-line velocity (VSL, μm/s), average path velocity (VAP, μm/s), and beat-cross frequency (BCF, Hz) as well as higher percentages (P < 0.01) of wobble and linearity compared to DM, irrespective of sperm viability. In addition, the number of urates present in the ejaculates obtained by EE was lower (P < 0.05) than those obtained by DM. In conclusion, electrical stimulation with prior sedation produced a low semen ejaculation response in fighting cocks. However, EE yielded semen ejaculates with better spermatic kinetic compared with the conventional dorsal massage technique.
Criopreservación de espermatozoides de gallo de combate: efecto de diferentes concentraciones de glicerol
(2022) Moscoso Piedra, Andrés; Reinoso Leon, Jaime Marcelo; Samaniego Campoverde, Jorge Xavier; Argudo Garzon, Daniel Ernesto; Alvarado Alvarado, Juan Carlos; Galarza Lucero, Diego Andrés
Glycerol (Gly) is the cryoprotective agent (CPA) most widely used to cryopreserve rooster semen. However, its cryoprotection, toxicity, and efficacy may vary in different breeds of roosters (e.g., fighting rooster). In this sense, this investigation evaluated the effect of different concentrations of Gly added to the Lake-Ravie extender on the kinetic variables and plasma membrane integrity (PMI, equivalent to viability) of rooster spermatozoa. A total of 42 semen ejaculates from 6 Spanish fighting roosters (collected in 7 weekly sessions) by dorsal massage technique were used to conform 7-pools. Each pool was divided into 6-aliquots and then 6 treatments were formed according to Gly concentrations: 0 (control), 2% (Gly-2), 4% (Gly-4), 6% (Gly-6), 8% (Gly-8), and 10% (Gly-10). The samples were frozen in static liquid nitrogen vapors, and their post-thaw sperm quality was analyzed using the CASA system (SCA-2018) and Fluorescence (PI). Results after thawing showed that total (MT, %) and progressive (MP, %) motilities were higher (P<0.01) with the Gly-8 treatment compared to the control group and the Gly-4 and Gly-6 treatments. Regarding the post-thaw kinetics, the oscillation (WOB, %) and the beat-cross frequency (BCF, Hz) were higher (P < 0.05) in the Gly-6, Gly-8, and Gly-10 treatments compared to their control. Finally, the PMI (%) was greater with the Gly-8 treatment compared to the Gly-2 treatment (P<0.05) and the control group (P<0.01). In conclusion, the addition of 8% glycerol to the freezing medium produced better sperm cryosurvival based on higher kinetics and integrity of the plasma membrane of fighting rooster spermatozoa.
Efecto de la presión de vacío sobre las características morfológicas de ovocitos bovinos obtenidos de ovarios de matadero
(Asociación Latinoamericana de Producción Animal, 2018) Argudo Garzon, Daniel Ernesto; Quezada Contreras, Adrian Ignacio; Mocha Zhispon, Armando Ramiro; Soria Parra, Manuel Elías; Méndez Álvarez, María Silvana; Ayala Guanga, Luis Eduardo; Galarza Alvarez, Luis Rodrigo; Perea Ganchou, Fernando Pedro; Perea Ganchou, Fernando Pedro
El efecto adverso de la presión de vacío sobre la competencia de los ovocitos recuperados mediante ovum pick up (OPU), y de los embriones obtenidos de estos, ha sido documentado previamente, pero poco se sabe sobre su efecto en las características morfológicas de los ovocitos. Se estableció como obejtivo del estudio evaluar el efecto de la presión de vacío sobre las características morfométricas de ovocitos bovinos recuperados de ovarios de matadero. El estudio se realizó en el Laboratorio de Biotecnología de la Reproducción Animal de la Universidad de Cuenca, Ecuador. Los ovarios recolectados (n=252) de un matadero local fueron divididos al azar de manera homogénea en tres grupos con diferente presión de aspiración folicular: 50, 65 y 80mmHg. Se aspiraron los folículos entre 2-8 mm de diámetro; para la punción se utilizó una aguja 18Gx1.5 pulgadas conectada a una bomba de vacío. Se recuperaron y seleccionaron los mejores COC´s (complejos cúmulos ovocito) de cada grupo: 50 (n=283), 65 (n=263) y 80 mmHg (n=226). Un 30% de cada grupo fueron colocados en un medio con hialuronidasa al 0,1% (p/v) y denudados por pipeteo sucesivo. Los ovocitos se fotografiaron con una cámara montada sobre un microscopio provisto con un software (AmScope V.3.7) calibrado para realizar mediciones microscópicas. El otro 70% de COC´s fueron incubados por 24hs en medio de maduración a base de TCM199, suero fetal bovino, FSH-p, estradiol, piruvato de sodio, L-glutamina y gentamicina en una estufa con 5% de CO2, 38.5°C y 90%rh. Luego de madurados, los COC´s fueron denudados y medidos como se indicó anteriormente. Los datos se analizaron con el programa estadístico SAS. Los ovocitos aspirados con 50mmHg antes de la maduración tuvieron un diámetro (sin zona pelúcida) y un volumen (125.8±0.5 µm y 1052327.9±11792.9 µm3) mayor que los obtenidos con 65 (123.3±0.5 µm y 990510.6±12603.9 µm3) o 80 mmHg (122.2±0.5 µm y 992296.4 ± 13652.9 µm3) (P<0,001). Luego de ser madurados, los ovocitos obtenidos con 50 mmHg tuvieron un diámetro y un volumen (121.9±0.6 µm y 954686.4±14072.2 µm3) mayor que los recuperados con 65 (120.1±0.6 µm y 913819.1±14879.8 µm3) (P<0,05), pero fueron similares a los obtenidos con 80 mmHg (121.4±0.7 µm y 945211.9±16359 µm3). Como conclusión, a mayor presión de vacío los ovocitos tendieron a ser más pequeños, es decir, tuvieron menor diametro y volumen. Asimismo, independientemente de la presión de aspiración, los ovocitos redujeron su diámetro y volumen como consecuancia de la maduración.
Efecto de la adición de melatonina en el medio de maduración y/o vitrificación de ovocitos sobre la producción in vitro de embriones bovinos
(2020) Méndez Álvarez, María Silvana; Argudo Garzon, Daniel Ernesto; Soria Parra, Manuel Elías; Galarza Alvarez, Luis Rodrigo; Perea Ganchou, Fernando Pedro
The effect of the addition of melatonin (Mt) on the maturation and / or vitrification of bovine oocytes on cleavage and subsequent embryonic development was evaluated.Oocyte-cumulus cell complexes (COCs) were obtained from creole cows by ovum pick up (OPU) and by follicular aspiration from abattoir ovaries (AO). From the pool of oocytes obtained from both sources, those with homogenous cytoplasm and three or more compact layers of cluster cells were selected. The selected COCs were randomly assigned to five treatments: T1, matured with Mt and vitrified without Mt; T2, matured and vitrified with Mt; T3, matured without Mt and vitrified with Mt; T4 (control) matured and vitrified without Mt; T5, matured without Mt and not vitrified. The concentration of Mt in the maturation and vitrification media was 0.01 µM (10-9 M). The oocytes were matured, vitrified, fertilized and the presumed zygotes cultured until day 7 post-fertilization in vitro. The data were analysed by logistic regression. Regardless of the origin of the oocytes, cleavage rate (C) and embryo production (EP) was similar between treatments. The C in the OPU oocytes was greater in T4, and the EP was similar between treatments. In AO, the results did not vary between treatment in C and EP. In conclusion, Mt reduced the C in oocytes collected by OPU, while it did not affect EP. In the AO oocyte source, the addition of Mt did not affect the C nor the EP.
Efecto de la temperatura de almacenamiento de epidídimos de toro sobre la calidad espermática de semen criopreservado
(2018) Valverde Peralta, Edwin Enrique; Argudo Garzon, Daniel Ernesto; Bueno Leon, Hernan Patricio; Quintero Moreno, Armando; Galarza Lucero, Diego Andrés
Epididymis sperm conservation is a technique widely used in animals of high genetic value as well as in wild animals dead unexpectedly. One factor that most influence in motility and sperm membrane integrity (plasma and acrosomal) as well as the fertilizing ability of epididymal spermatozoa recovered is post-mortem temperature storage of epididymis. The objective of this study was determinate sperm quality pre-freezing and post-thawed of bull epididymal sperm (Bos taurus) from the Ecuadorian Amazon recovered from testicles stored to 5 or 20ºC for short-time. For this propose, ten pairs of testicles were collected from slaughterhouse. Left and right testicles of each bull were storage at 5ºC (T-5 group) or 20ºC (T-20 group), respectively during 6 hours (h). Sperm recovery was performed by retrograde flow of the epididymis tail and the liquid obtained was diluted in AndroMed® extender at concentration of 200 x 106 spermatozoa/ mililiters mL and packed in 0.25 mL straws. Both straws T-5 (n = 30) and T-20 (n = 30) groups were frozen in vapors of nitrogen liquid and thawed at 37ºC for 60 seconds (sec). The effect of storage temperature of epididymis post-mortem were assessment by ANOVA-one way. The results showed that in pre-freezing analysis, the percentage of motility (analyzed by optical microscopy), sperm vitality (V, plasma membrane integrity analyzed by eosin- nigrosine stain) and total morphological abnormalities (TA) of spermatozoa of T-5 group did no showed significant differences (P>0.05) compared with T-20 group. In post-thawed analysis, likewise the motilities variables (assessed by CASA system, SpermVision®, Minitube, Germany) as well as TA did no showed significant differences (P>0.05) between T-5 and T-20 groups. Sperm vitality (V) in samples thawed was higher (P<0.05) with T-5 group than T-20 group (63.0 ± 2.6% y 52.9 ± 3.0%, respectively). However, in plasma membrane functionality analysis assessed by hypoosmotic test (HOST) showed higher values (P<0.05) with T-20 group than T-5 group (40.4 ± 3.26% and 31.3 ± 1.99%). In conclusion, the results suggest that, despite the controversies found in the integrity and functionality plasma membrane post-thawed, the epididymis from Bull slaughtered under environment conditions of Ecuadorian Amazon may be storage at 5 or 20ºC during short-term. Additional studies should be made to evaluate the fertilizing ability of these epididymal sperm after artificial insemination (AI) under filed conditions.
Effect of delayed addition of fetal calf serum to the culture medium on in vitro embryo production from creole heifers raised in a high altitude in Ecuador
(2024) Méndez Álvarez, María Silvana; Perea Ganchou, Fernando Pedro; Galarza Lucero, Diego Andrés; Galarza Alvarez, Luis Rodrigo; Argudo Garzon, Daniel Ernesto; Soria Parra, Manuel Elías
This experiment aimed to assess the effect of fetal calf serum (FCS) added to culture medium on day 5 to 7 after in vitro fertilization on production and subsequent cryotolerance of blastocysts from Ecuadorian Creole heifers. Immature cumulus-oocyte complexes (COCs) were collected by ovum pick-up (OPU) from 10 Creole heifers and from ovaries collected at abattoir in eight collection sessions. COCs were subjected to in vitro maturation (IVM), fertilization (IVF), and culture (IVC). On day 1 after IVF, presumptive embryos from each oocyte source (OPU [O] and Abattoir [A]) were allocated randomly in two groups according to whether 2.5% (v/v) FCS was added to culture medium on day 5 after IVF: 1) O-FCS+, 2) O-FCS-, 3) A-FCS+, and 4) A-FCS-. On day 7 after IVF, high quality embryos were vitrified. Cryotolerance of vitrified-warmed embryos was assessed according to blastocele re-expansion at 2 h and subsequent re-expansion and hatching at 24 and 48 h of re-incubation. Blastocysts rate on day 7 did not differ between oocyte source and FCS group. After vitrification/warming process, addition of FCS affected the re-expansion rate only at 2 h, irrespective of the oocyte source (p<0.05). Likewise, blastocysts hatching rate at 48 h of incubation was drastically affected only in OPUderived oocyte (p<0.01). Supplementation of FCS on day 5 after IVF did not improve blastocyst production and adversely affected the cryotolerance of in vitro bovine embryos derived from creole heifers raised on Ecuadorian Andean highlands.
Effect of fetal calf serum on production and crytolerance of in vitro bovine embryos from ecuadorian creole heifers
(CSIRO PUBLISHING, 2018) Méndez Álvarez, María Silvana; Soria Parra, Manuel Elías; Galarza Alvarez, Luis Rodrigo; Perea Ganchou, Fernando Pedro; Argudo Garzon, Daniel Ernesto; Méndez Álvarez, María Silvana
In the Ecuadorian Andes there is a Creole bovine biotype whose population is disappearing. In vitro embryo production and cryopreservation is an important biotechnology that allows the conservation of animals threatened with extinction. The objective of this study was to determine the in vitro production and cryopreservation of embryos from creole heifers raised in the highlands of Ecuador. Immature cumulus-oocyte complexes (COC´s) were retrieved by ovum pickup from 10 Creole heifers (OPU) and from abattoir ovaries (control). The experiment was completed within 8 replicates. COC´s were cultured in a maturation medium following IVF and in vitro culture. After denudation (Day 1 after IVF), presumptive embryos from each oocyte source were split into 2 groups: with (FCS+) and without (FCS-) FCS (2,5%), which was added on day 5 after IVF. On day 7, embryos were evaluated, and those with quality I were vitrified. After warming embryo re-expansion at 2h and embryo re-expansion and hatching at 24 and 48h were evaluated. Regardless of the oocyte source, the addition of 2,5% FCS decreased embryo re-expansion at 2h and reduced embryo hatching at 48h in the OPU group. In conclusion, FCS did not improve embryo production and adversely affected the cryotolerance of embryos produced in vitro from Ecuadorian creole heifers.
Effect of the addition of melatonin in the oocyte maturation and/or vitrification medium on in vitro production of bovine embryos
(2020) Méndez Álvarez, María Silvana; Argudo Garzon, Daniel Ernesto; Soria Parra, Manuel Elías; Galarza Alvarez, Luis Rodrigo; Perea Ganchou, Fernando Pedro
The effect of the addition of melatonin (Mt) on the maturation and / or vitrification of bovine oocytes on cleavage and subsequent embryonic development was evaluated. Oocyte-cumulus cell complexes (COCs) were obtained from creole cows by ovum pick up (OPU) and by follicular aspiration from abattoir ovaries (AO). From the pool of oocytes obtained from both sources, those with homogenous cytoplasm and three or more compact layers of cluster cells were selected. The selected COCs were randomly assigned to five treatments: T1, matured with Mt and vitrified without Mt; T2, matured and vitrified with Mt; T3, matured without Mt and vitrified with Mt; T4 (control) matured and vitrified without Mt; T5, matured without Mt and not vitrified. The concentration of Mt in the maturation and vitrification media was 0.01 µM (10-9 M). The oocytes were matured, vitrified, fertilized and the presumed zygotes cultured until day 7 post-fertilization in vitro. The data were analysed by logistic regression. Regardless of the origin of the oocytes, cleavage rate (C) and embryo production (EP) was similar between treatments. The C in the OPU oocytes was greater in T4, and the EP was similar between treatments. In AO, the results did not vary between treatment in C and EP. In conclusion, Mt reduced the C in oocytes collected by OPU, while it did not affect EP. In the AO oocyte source, the addition of Mt did not affect the C nor the EP.
Evaluación de la calidad de ovocitos provenientes de vaquillas criollas y ovarios de matadero para formar bancos de germoplasma
(2018) Alvarado Ulloa, Jhonatan Marcelo; Argudo Garzon, Daniel Ernesto; Méndez Álvarez, María Silvana; Perea Ganchou, Fernando Pedro; Soria Parra, Manuel Elías; Soria Parra, Manuel Elías
El bovino criollo americano descendiente del ganado ibérico, se adaptó fenotípica y genotípicamente a la región andina, generando biotipos que se caracterizan por rusticidad, eficiencia reproductiva y baja producción lechera, provocando la sustitución por otras razas de alta producción Holstein y Brown-Swiss. En términos biológicos, ocasiona pérdida importante del material genético, patrimonio del país, por esto se promueve la conservación de gametas y embriones mediante biotécnicas reproductivas creando bancos de germoplasma. El objetivo fue evaluar la calidad de ovocitos recuperados a partir de aspiración folicular transvaginal guiada por ultrasonografía (OPU) en ganado criollo y aspiración folicular en ovarios de matadero. Se emplearon 10 novillas criollas, cíclicas, condición corporal 3 a 3,5; en pastoreo con suministro de minerales; y 200 ovarios de matadero. Se recuperaron ovocitos por OPU y aspiración folicular, con agujas 18G, a 90mmHg de presión. Se clasificaron en tres categorías A, B, C. La morfometría se determinó con una cámara de alta definición colocada sobre un microscopio invertido con lente 10X y equipado con software AmScope V.3.7. La viabilidad se evaluó con azul tripán y la actividad enzimática con test de azul de cresilo brillante (BCB). El análisis estadístico utilizó la prueba de Chi-cuadrado y estadístico “U de Mann Withney” (P<0,05). En relación a la calidad de ovocitos, se observaron diferencias significativas según la procedencia (P<0,05), siendo mejores los obtenidos de ovarios de matadero. Mocha & Quezada (2017) obtuvieron ovocitos de mejor calidad por OPU con presión de 65mmHg, factor que probablemente incidió en la característica de las células recuperadas en nuestra investigación. La viabilidad y actividad enzimática de los ovocitos A y B de OPU y Camal no expresan diferencias significativas (P>0,05); se observó que las hembras bovinas criollas producen mayor porcentaje de ovocitos clase A capacitados para el desarrollo in vitro (82,9%) que de matadero (70,6%), diferencia explicable por el estado de los ovarios al momento de la colecta y tiempo transcurrido hasta la aspiración. Mota (2008) evaluó actividad enzimática mediante BCB en ovocitos de matadero y obtuvo 60,37% BCB (-) de respuesta a la prueba. Se concluye que los ovocitos recuperados de calidad A y B de ovarios de matadero por aspiración folicular representan un mayor porcentaje con relación a los A y B obtenidos por OPU. La viabilidad y actividad enzimática no muestra diferencia, siendo útiles para programas FIV y formación de bancos de germoplasma.
Intraovarian influence of bovine corpus luteum on oocyte morphometry and developmental competence, embryo production and cryotolerance.
(2020) Argudo Garzon, Daniel Ernesto; Tenemaza Cumbe, Milton Alejandro; Merchan Vargas, Shirley Lissette; Balvoa Tenelema, Jose Agustin; Méndez Álvarez, María Silvana; Soria Parra, Manuel Elías; Galarza Alvarez, Luis Rodrigo; Ayala Guanga, Luis Eduardo; Hernandez Fonseca, Hugo Jose; Perea Brugal, Mariana Sofia; Perea Ganchou, Fernando Pedro
Three experiments were conducted to determine influence of the bovine corpus luteum (CL) on morphometric and functional characteristics of oocytes, and subsequent embryonic development. Cumulus-oocyte complexes were aspirated from two types of cows: 1) with a CL in one ovary (CL+) and without a CL in the contralateral ovary (CL-), 2) and from cows without CL in either ovary (C). Intracellular activity of the enzyme glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PDH), oocyte diameter and thickness of the zona pellucida were determined (Experiment 1). Then, the rate of in vitro oocyte maturation for each ovarian category was evaluated and oocyte diameter and zona pellucida thickness were measured after maturation (Experiment 2). In Experiment 3, in vitro embryo production and cryotolerance were assessed. The oocyte diameter was greater (P 0.05) or C (P = 0.0131) ovaries. Activity of G6PDH was lower in oocytes from CL+ than CL- (P < 0.01) and C (P = 0.0148) ovaries. Rate of oocyte maturation, oocyte diameter and thickness of the zona pellucida after maturation did not differ among groups. Rate of cleavage was greater in zygotes from CL+ than from CL- or C (P < 0.01); and CL+ ovaries produced more total embryos on day 7 (P < 0.05) and more blastocysts (P < 0.01) than CL- and C ovaries. Rate of expansion and hatching of day-7 vitrified-warmed blastocysts at 24 and 48 h of culture did not differ among groups. In conclusion, oocytes collected from CL+ ovaries were larger and metabolically more prepared to continue maturation than those from ovaries lacking a CL. Also, rates of cleavage and yield of blastocysts were greater for oocytes from CL+ ovaries than from CL- and C ovaries. These findings indicate that a CL influenced oocyte developmental competence and embryonic development, presumably through intraovarian interactions.
La presencia de un cuerpo lúteo activo modifica la tasa de maduración pero no afecta la morfometría de los ovocitos bovinos
(Asociación Latinoamericana de Producción Animal, 2018) Argudo Garzon, Daniel Ernesto; Balvoa Tenelema, Jose Agustin; Tenemaza Cumbe, Milton Alejandro; Méndez Álvarez, María Silvana; Soria Parra, Manuel Elías; Galarza Alvarez, Luis Rodrigo; Ayala Guanga, Luis Eduardo; Perea Ganchou, Fernando Pedro; Argudo Garzon, Daniel Ernesto
En la actualidad, la información publicada sobre la influencia que tiene un cuerpo lúteo activo o funcional sobre la capacidad de maduración y morfometría de los ovocitos bovinos presentan aún discrepancias. Se estableció como objetivo de investigación determinar el efecto de la presencia de un cuerpo lúteo activo sobre la tasa de maduración y la morfometría de ovocitos bovinos obtenidos de ovarios de matadero. El estudio se llevó a cabo en el Laboratorio de Biotecnología de la Reproducción Animal de la Universidad de Cuenca, Ecuador. Se colectaron ovarios con cuerpo lúteo activo o funcional (CCL; n=30) y sin estructura lútea alguna (SCL; n=60) del matadero municipal de la ciudad de Cuenca. Con una jeringa desechable y una aguja calibre 18x1.5 pulgadas se puncionaron todos los folículos antrales de 2-8mm de cada ovario. Posteriormente, del líquido folicular obtenido se recuperaron y seleccionaron los mejores complejos cúmulos ovocitos (Coc’s) de cada grupo de ovarios: CCL (n=242) y SCL (n=523), los cuales fueron incubados por 24hs en un medio de maduración a base de TCM199, suero fetal bovino, FSH-p, estradiol, piruvato de sodio, L-glutamina y gentamicina en una estufa con 5% de CO2, 38.5°C y 90%rh. Luego de madurados, los Coc´s fueron denudados por pipeteo en una solución de hialuronidasa 0.1% (p/v) e inmediatamente teñidos con Hoechst 33342 y observados en un microscopio de fluorescencia. Aquellos que habían expulsado el primer corpúsculo polar se consideraron maduros, y este resultado fue expresado en porcentaje. Consecutivamente los ovocitos fueron fotografiados con una cámara acoplada a un microscopio provisto con un software (AmScope V.3.7) calibrado para mediciones microscópicas, cuyas medidas fueron expresadas en micrómetros. Los resultados fueron analizados con el software estadístico SAS. Los Coc´s provenientes de ovarios CCL tuvieron un espesor estadísticamente similar que los de SCL (16,0±0,18 y 15,8±0,22 µm). Asimismo, en las dos categorías de ovarios (CCL y SCL) el diámetro (125,9±0,49 y 126,5±0,57 µm) y el volumen (1´060.254,6±12502,0 y 1´072.845,0±11748,3µm3) fue también similar. Sin embargo, la tasa de maduración fue mayor (P<0,0001) en los ovocitos provenientes de ovarios CCL que en los SCL (62,8 ± 1.3 y 47,3 ± 1.6%). Se concluye que los Coc´s que fueron recuperados de ovarios que tenían un cuerpo lúteo activo o funcional presentaron una mayor tasa de maduración, pero iguales características morfométricas.
Methods of collection, extender type, and freezability of semen collected from creole bulls raised in the tropical highlands of Ecuador
(2019) Argudo Garzon, Daniel Ernesto; Galarza Lucero, Diego Andrés; Bueno Leon, Hernan Patricio; Iñiguez Gutierrez, Carlos Ulises; Méndez Álvarez, María Silvana; Soria Parra, Manuel Elías; Torres Inga, Carlos Santiago; Perea Ganchou, Fernando Pedro; Alberio Null, Ricardo Horacio
This study was conducted to determine the best combination between two collection method and two extenders in the cryopres-ervation of semen from creole bulls adapted to highlands of the Ecuadorian Andes. Sixty ejaculates from three adult Creole bulls were evaluated after collection by artificial vagina (AV) and electroejaculation (EE). Semen samples were split into two aliquots and diluted with a soy lecithin extender (Andromed®; A) or an egg yolk-containing extender (Triladyl®; T) and packed in straws of 0.25 ml with 20 × 106 sperms. Optical microscopy and computer-assisted semen analysis system (CASA) were used to evaluate semen quality characteristics. The effects of collection methods and extender type as well as its interaction were evaluated by a factorial ANOVA and Bonferroni’s test. Semen samples collected with EE and frozen with T (EE-T) and A (EE-A) had greater proportion of spermatozoa with optical assessed individual progressive motility (IPM), plasmatic membrane intact (HosT), and lower tail abnormalities than those obtained with AV and frozen with the same extenders (AV-T and AV-A);however, differences were significant only between EE-A and AV-T. CASA assessment indicated that the total mobility (TM) was greater (P < 0.05) in semen samples diluted with T, although these samples had a greater proportion (P < 0.05) of sperms with local motility (LM) and fewer immobile sperms (IS), than those extended with A. Generally, semen samples obtained with EE or AV and diluted with T seems to be the best option to ciopreserve gametes of Creole bulls raised in highlands of Ecuadorian Andes.
Morphological and histological characteristics of ovaries from two genetic groups of guinea pigs (Cavia porcellus) from South America
(2022) Perea Ganchou, Fernando Pedro
This study aimed to describe morphological and histological characteristics of ovaries of two genetic groups of guinea pigs from Latin America. Ovaries from 20 improved and 20 native guinea pigs were collected after slaughtering. One ovary from each animal was weighed, measured, counted for visible follicles on the ovarian surface, and used for subsequent oocyte collection by the slicing method. Contralateral ovaries were used to prepare histological sections and quantify follicles. Body and ovary weight and ovary length were significantly greater in improved than in native guinea pigs (p<0.01). Ovarian weight was greater in diestrus than in proestrus (p=0.0632) only in improved animals. The number of primordial, primary, secondary, and total follicles did not differ between genetic groups. The number of antral follicles was significantly greater in improved than in native guinea pigs. The thickness of zona pellucida and oocyte diameter did not differ between groups. The thickness of the zona pellucida was significantly greater in oocytes of category A than B and C in both groups of guinea pigs. In conclusion, ovaries from improved guinea pigs were heavier and longer than those from native animals. The number of antral follicles was greater in improved than native guinea pigs. Zona pellucida thickness and oocyte diameter were similar in both groups of guinea pigs.
Valoración de dos protocolos de superovulación para la producción de embriones en vacas Holstein
(2018) Méndez Álvarez, María Silvana; Soria Parra, Manuel Elías; Argudo Garzon, Daniel Ernesto; Torres Inga, Carlos Santiago; Soria Parra, Carlos Alonso; Galarza Lucero, Diego Andrés; Serpa Garcia, Victor Guillermo
The aim of this paper was to compare the effects of two superovulation protocols: synchronization of the follicular wave (SFW), and natural estrus (NE) induction of embryos produced for transference in Holstein cows. Twenty cows were chosen as donors, with body condition (BC) of 2.75-3.5; 40-60 months old; 1-2 previous services per ges-tation, and without reproductive problems. Two superovulation protocols were applied: SFW and NE. SFW was not observed to produce more embryos than the NE in the blastocyst and morula stages.