Generación de moléculas derivadas de anticuerpos de IgY (Gallus gallus domesticus) para la detección antigénica del Protoparvovirus carnivoro 1
No Thumbnail Available
Date
2026-02-12
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Universidad de Cuenca. Facultad de Ciencias Agropecuarias
Abstract
Canine parvovirus 2 (CPV-2), a subspecies of carnivore protoparvovirus 1, is one of the main causes of viral gastroenteritis in dogs, generating high morbidity and mortality rates. The objective of this study was to design, express, and validate recombinant proteins based on IgY antibody fragments derived from Gallus gallus domesticus, specifically αVP2scFv and its mimetic variant αVP2scFvM, aimed at the antigenic detection of CPV-2.The genetic constructs were designed in silico and cloned into expression vectors pET28-SP-MCS-APEc and pET15- MCS-PoBP, which incorporated polystyrene-binding peptides (PoBP) and alkaline phosphatase (APEc) as adhesion domains and colorimetric signal generation. The recombinant proteins were heterologously expressed in Escherichia coli Rosetta 2 (DE3) and purified by immobilized metal affinity chromatography. Functional validation was performed using immunoenzymatic assays, capture ELISA, and Dot blot, using antigenic extracts of VP2, commercial vaccines, and biological samples, demonstrating specific antigen recognition and detectable enzymatic activity in the dot blot. The results showed that the recombinant proteins developed constitute a viable platform for the antigenic diagnosis of CPV-2 in the veterinary field.
Resumen
El Parvovirus canino 2 (CPV-2), una subespecie del Protoparvovirus carnívoro 1, es uno de los principales causantes de gastroenteritis viral en caninos, generando elevadas tasas de morbilidad y letalidad. El objetivo del presente estudio fue diseñar, expresar y validar proteínas recombinantes basadas en fragmentos de anticuerpos IgY derivados de Gallus gallus domesticus, específicamente αVP2scFv y su variante mimética αVP2scFvM, orientadas a la detección antigénica del CPV-2.Las construcciones genéticas fueron diseñadas in silico y clonadas en vectores de expresión pET28-SP-MCS-APEc y pET15- MCS-PoBP, estos incorporando péptidos de unión a Poliestireno (PoBP) y la Fosfatasa alcalina (APEc) como dominios de adhesión y generación de señal colorimétrica. Las proteínas recombinantes fueron expresadas heterólogamente en Escherichia coli Rosetta 2 (DE3) y purificadas mediante cromatografía de afinidad a metales inmovilizados. La validación funcional se realizó mediante ensayos inmunoenzimáticos, ELISA de captura y Dot blot, utilizando extractos antigénicos de VP2, vacunas comerciales y muestras biológicas, evidenciándose reconocimiento específico del antígeno y actividad enzimática detectable en el Dot blot. Los resultados demostraron que las proteínas recombinantes desarrolladas constituyen una plataforma viable para el diagnóstico antigénico del CPV-2 en el ámbito veterinario.
Keywords
Medicina Veterinaria, Caninos, Gastroenteritis, Parvovirus canino 2
Citation
Código de tesis
TV; 645
Código de tesis
Grado Académico
Médico Veterinario