Efecto de la adición de tres factores de crecimiento (EGF, LIF, ITS) y su combinación sobre la maduración in vitro de ovocitos de cobaya
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Date
2025-04-16
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Publisher
Universidad de Cuenca
Abstract
This study evaluated the effect of adding epidermal growth factor (EGF), leukemia inhibitory factor (FIL), insulin-transferrin-selenium (ITS), and their combination on the in vitro maturation (IVM) of guinea pig oocytes. Ovaries were collected from a local slaughterhouse and transported to the laboratory at 34–37 °C. Cumulus-oocyte complexes (COCs) were recovered by slicing and selected based on morphological quality; only suitable COCs were used for IVM. Selected COCs were randomly assigned to five treatments: T0 (control): base medium (BM) composed of TCM-199 supplemented with sodium pyruvate, glutamine, gentamicin, and bovine serum albumin; T1: BM + 50 ng/ml EGF; T2: BM + 100 ng/ml FIL; T3: BM + 5 µg/ml ITS; and T4: BM + EGF, FIL, and ITS combined at the same concentrations. All groups were incubated for 24 hours. Cumulus expansion was evaluated by measuring cluster thickness before and after IVM, and nuclear maturation status was determined using Hoechst staining. Data were analyzed by ANOVA and the LSMEAN test. The addition of EGF, FIL, ITS, or their combination did not significantly affect the rate of nuclear maturation, which ranged from 16.3% to 24.8%, nor did it influence the proportion of immature or degenerated oocytes. However, cumulus thickness was significantly affected by treatment (P < 0.0001). In conclusion, while the supplementation of growth factors did not improve nuclear maturation in guinea pig oocytes, it did influence cumulus cell expansion during in vitro maturation.
Resumen
El estudio examinó el efecto de la adición del factor de crecimiento epidermal (EGF), factor inhibidor de leucemia (FIL) e insulina transferrina y selenio (ITS) y su combinación, sobre la maduración in vitro de ovocitos de cobayas. Los ovarios fueron colectados en un matadero local y se transportaron al laboratorio a 34-37 °C. Los complejos células cúmulo-ovocito (COCs) fueron recuperados mediante slicing y por sus características morfológicas categorizadas en aptos y no aptos, utilizando únicamente los aptos en la maduración in vitro. Los COCs seleccionados se asignaron aleatoriamente a los tratamientos: T0: medio base (MB) compuesto por TCM-199 suplementado con varias sustancias; T1: MB + 50 ng/ml de EGF; T2: MB + 100 ng/ml de FIL; T3: MB + 5 ug/ml de ITS; T4: MB + 50 ng/ml de EGF + 100 ng/ml de FIL + 5 ug/ml de ITS. Estos fueron incubados in vitro por 24 horas. Se midió el grosor del cúmulo antes y después de la maduración in vitro, y se determinó el estatus nuclear posmaduración de los ovocitos mediante tinción con Hoescht. Los datos se analizaron mediante ANOVA y la prueba LSMEAN. El porcentaje de maduración no fue afectada por el tratamiento, y varió entre 16,3 y 24,8%. El porcentaje de ovocitos inmaduros y degenerados fue estadísticamente similar entre grupos. El grosor del cúmulo pre y pos maduración fue afectado por el tratamiento (P<0,0001). En conclusión, la adición de los factores de crecimiento o de la combinación de ellos no influenció la tasa de maduración nuclear de ovocitos de cobaya, pero si el grosor del cúmulo.
Keywords
Medicina Veterinaria, Cobayas, Preproducción asistida
Citation
Código de tesis
TV; 574
Código de tesis
Grado Académico
Médico Veterinario Zootecnista