Evaluación de la proteína quimérica dD(SpA)-p6-dC1(SpG)-ApEcoli para la detección de anticuerpos
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Date
2025-02-11
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Publisher
Universidad de Cuenca
Abstract
Diagnosis of infectious diseases in veterinary medicine is essential for the adequate and timely management of diseases in animals. To achieve this objective, the availability of diagnostic tests is necessary; however, currently these tools must be imported. Therefore, this study presents the functional evaluation of the chimeric protein dD(SpA)-p6-dC1(SpG)- ApEcoli, which allows the detection of canine (Canis lupus familiaris) and bovine (Bos taurus) antibodies in assays such as indirect ELISA and Western blot. The protein combines the D domain of protein A (Staphylococcus aureus), the C1 domain of protein G (Streptococcus spp.), and Alkaline phosphatase from Escherichia coli. The production of the protein was carried out in the bacterial strain E. coli Rosetta 2 (DE3), using the plasmid pET28-PAp6PG-APEcoli-HT. After induction with IPTG and purification by immobilized metal affinity chromatography (IMAC), the presence of the protein and enzymatic activity were evident indirect ELISA, Western blot and Dot blot assays demonstrated that the dD(SpA)-p6- dC1(SpG)-ApEcoli protein recognizes antibodies from seropositive canines and bovines against antigens such as the VP2 protein of Carnivore protoparvovirus 1 and the p24 of Bovine leukemia virus. This development is relevant for Ecuador, where there is no production of local inputs for the development of diagnostic tests for diseases of veterinary interest. The protein obtained could reduce costs and improve access to accurate diagnoses for a wide range of animal species, contributing to the control of infectious diseases.
Resumen
El diagnóstico de enfermedades infecciosas en medicina veterinaria es fundamental para el manejo adecuado y oportuno de las enfermedades en los animales. Para lograr este objetivo se hace necesario la disponibilidad de pruebas diagnósticas, sin embargo, actualmente estas herramientas deben importarse. Por lo anterior, en este estudio se presenta la evaluación funcional de la proteína quimérica dD(SpA)-p6-dC1(SpG)-ApEcoli, que permite la detección de anticuerpos caninos (Canis lupus familiaris) y bovinos (Bos taurus) en ensayos como ELISA indirecto y Western blot. La proteína combina el dominio D de la proteína A (Staphylococcus aureus), el dominio C1 de la proteína G (Streptococcus spp.), y la Fosfatasa alcalina de E. coli. La producción de la proteína se realizó en la cepa bacteriana E. coli Rosetta 2 (DE3), utilizando el plásmido pET28-PAp6PG-APEcoli-HT. Tras la inducción con IPTG y purificación mediante cromatografía de afinidad a metales inmovilizados (IMAC), se evidenció la presencia de la proteína y la actividad enzimática. Los ensayos de ELISA indirecto, Western blot y Dot blot demostraron que la proteína dD(SpA)- p6-dC1(SpG)-ApEcoli reconoce anticuerpos de caninos y bovinos seropositivos frente a antígenos como la proteína VP2 del Protoparvovirus carnivoro 1 y la p24 del Virus de leucemia bovina. Este desarrollo es relevante para Ecuador, donde no se cuenta con la producción de insumos locales para el desarrollo de pruebas diagnósticas de enfermedades de interés veterinario. La proteína obtenida podría reducir costos y mejorar el acceso a diagnósticos precisos para una amplia gama de especies animales, contribuyendo al control de enfermedades infecciosas.
Keywords
Medicina Veterinaria, Patologías animales, Antígenos, Anticuerpos
Citation
Código de tesis
TV; 560
Código de tesis
Grado Académico
Médico Veterinario