Optimización de un método de formación y cuantificación de biopelículas in vitro en cepas de Staphylococcus aureus meticilino resistente (SARM) aisladas de clínicas odontológicas de la ciudad de Cuenca
| dc.contributor.advisor | Moscoso Romo, María Paz | |
| dc.contributor.author | Barrera Castillo, Maydelin Jasley | |
| dc.contributor.author | Morocho Patiño, Daniela Alexandra | |
| dc.date.accessioned | 2026-02-23T22:43:31Z | |
| dc.date.available | 2026-02-23T22:43:31Z | |
| dc.date.issued | 2026-02-18 | |
| dc.description | Staphylococcus aureus resistente a meticilina (SARM) es un patógeno con elevada capacidad para formar biopelículas, favoreciendo su persistencia y resistencia a la desinfección. La optimización de métodos in vitro para su formación y cuantificación permite obtener modelos experimentales reproducibles y comparables para evaluar de forma confiable agentes con actividad anti-biopelículas. Objetivo: Establecer un protocolo para la formación y cuantificación de biopelículas in vitro en cepas de SARM, así como determinar su capacidad formadora y comparar métodos colorimétricos para su cuantificación. Metodología: Se desarrolló un estudio experimental estructurado en tres fases. En la primera fase se estableció el protocolo experimental utilizando seis cepas de SARM (23, 61, 122, 259, 1037 y 1098), y Staphylococcus aureus ATCC 25923TM y BAA-44TM como controles positivos. En la segunda fase se evaluó la capacidad formadora de biopelículas mediante la cuantificación de biomasa con cristal violeta y la determinación de la actividad metabólica mediante MTT y resazurina, con lecturas espectrofotométricas. En la tercera fase se compararon los métodos mediante análisis estadístico ANOVA – Tukey para evaluar la reproducibilidad y la correlación entre las técnicas. Resultados: Las cepas tuvieron una capacidad formadora diferente en donde se clasificaron como no productoras, productoras débiles, moderadas y fuertes con el método de cristal violeta. El ensayo con MTT evalúo los porcentajes de viabilidad celular de cada cepa de forma eficaz. Se observó una correlación entre los resultados en ambos ensayos, mientras que el ensayo con resazurina no fue reproducible estadísticamente. Conclusión: Los protocolos de cristal violeta y MTT fueron reproducibles y confiables para la formación y cuantificación de biopelículas evaluando la biomasa y viabilidad, representando una herramienta clave para investigaciones futuras sobre el comportamiento bacteriano y estrategias antimicrobianas. | |
| dc.description.abstract | Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) is a pathogen with a high capacity to form biofilms, which promotes its persistence and resistance to disinfection. Optimizing in vitro methods for biofilm formation and quantification allows for the development of reproducible and comparable experimental models to reliably evaluate agents with antibiofilm activity. Objective: To establish a protocol for the in vitro formation and quantification of biofilms in MRSA strains, as well as to determine their biofilm-forming capacity and compare colorimetric methods for their quantification. Methodology: A structured experimental study was developed in three phases. In the first phase, the experimental protocol was established using six MRSA strains (23, 61, 122, 259, 1037, and 1098), and Staphylococcus aureus ATCC 25923TM and BAA-44TM as positive controls. In the second phase, biofilm-forming capacity was evaluated by quantifying biomass with crystal violet and determining metabolic activity using MTT and resazurin, with spectrophotometric readings. In the third phase, the methods were compared using ANOVA – Tukey statistical analysis to assess reproducibility and correlation between the techniques. Results: The strains exhibited varying biofilm-forming capacity, classified as non-producers, weak producers, moderate producers, and strong producers using the crystal violet method. The MTT assay effectively evaluated the cell viability percentages of each strain. A correlation was observed between the results of both assays, while the resazurin assay was not statistically reproducible. Conclusion: The crystal violet and MTT protocols were reproducible and reliable for biofilm formation and quantification by evaluating biomass and viability, representing a key tool for future research on bacterial behavior and antimicrobial strategies. | |
| dc.description.uri | 0000-0002-5736-6201 | |
| dc.format | application/pdf | |
| dc.format.extent | 66 páginas | |
| dc.identifier.uri | https://dspace.ucuenca.edu.ec/handle/123456789/48090 | |
| dc.language.iso | spa | |
| dc.publisher | Universidad de Cuenca. Facultad de Ciencias Químicas | |
| dc.relation.ispartof | TBQ; 959 | |
| dc.rights | https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0 | |
| dc.rights.accessRights | openAccess | |
| dc.subject | Bioquímica | |
| dc.subject | Cristal violeta | |
| dc.subject | Resazurina | |
| dc.subject.other | Bioquímica::Compuestos Químicos | |
| dc.title | Optimización de un método de formación y cuantificación de biopelículas in vitro en cepas de Staphylococcus aureus meticilino resistente (SARM) aisladas de clínicas odontológicas de la ciudad de Cuenca | |
| dc.type | bachelorThesis | |
| dcterms.description | Bioquímico Farmacéutico | |
| dcterms.spatial | Cuenca, Ecuador |