Title: | Efecto de la sacarosa, trehalosa y rafinosa en la vitrificación de espermatozoides equinos |
Authors: | León Quinteros, Máximo Emiliano Sacoto Patiño, Karen Mercedes |
metadata.dc.contributor.advisor: | Galarza Lucero, Diego Andrés |
metadata.dc.description.uri: | 0000-0002-0266-5431 |
metadata.dc.subject.other: | Clasificación de la Investigación::Veterinaria::Producción Animal::Equinos |
Keywords: | Compuestos orgánicos Cultivo in vitro Gametos Crioprotectores |
Issue Date: | 5-Feb-2024 |
metadata.dc.format.extent: | 84 páginas |
Publisher: | Universidad de Cuenca |
metadata.dc.type: | bachelorThesis |
Abstract: | This research evaluated the effect of different non-penetrating cryoprotective agents (NCPAs)
in the vitrification of equine spermatozoa. To achieve this, 16 ejaculates from four Spanish
horses were collected using an artificial vagina. Each ejaculate was diluted with the
Botusemen-Gold®
diluent + 1% BSA and divided into four aliquots to form four respective
treatments based on conventional freezing (CF, control) and vitrification with NCPAs: 100 mM
sucrose (VIT -Su); 100 mM trehalose (VIT-Tr); and 50 mM raffinose (VIT-Raf). CF was
performed using liquid nitrogen vapors (LN2), while vitrifications were carried out by
submerging 30 µL drops directly into LN2. the results of sperm samples showed that the CF
treatment produced higher (P < 0.01) motility, kinematics, and membrane integrity compared
to all vitrification treatments. However, all three vitrification treatments exhibited higher values
(P < 0.05) for straight-line velocity, linearity, and oscillation than the CF treatment.
Furthermore, VIT-Su and VIT-Ra treatments showed higher values (P<0.05) for total and
progressive motility, as well as plasma and acrosomal membrane integrity, compared to the
VIT-Tr treatment. Finally, all vitrification and CF treatments increased (P<0.05) the length and
area of sperm heads compared to their fresh counterparts. In conclusion, despite conventional
freezing resulting in higher sperm cryosurvival, vitrification with sucrose and raffinose
produced greater motility and membrane integrity compared to trehalose, making it an
attractive method for cryopreserving equine spermatozoa. |
Description: | Esta investigación evaluó el efecto de diferentes agentes crioprotectores no penetrantes
(ACNP) en la vitrificación de espermatozoides equinos. Para ello, se usaron 16 eyaculados
de cuatro caballos españoles, recogidos mediante vagina artificial. Cada eyaculado fue diluido
con el diluyente Botusemen-Gold®
+ 1% BSA y dividido en 4 alícuotas para conformar cuatro
tratamientos respectivamente, según la congelación o vitrificación con ACNP: congelación
convencional (CC, control), y vitrificación con 100 mM sacarosa (VIT-Sa); con 100 mM
trehalosa (VIT-Tre); y con 50 mM rafinosa (VIT-Raf). La CC se hizo en vapores de nitrógeno
líquido (NL2), mientras que las vitrificaciones sumergiendo gotas de 30 µl directamente en
NL2. Los resultados de las muestras espermáticas después de la descongelación y
calentamiento demostraron que el tratamiento CC produjo una mayor (P<0,01) motilidad,
cinemática e integridad de membranas en comparación con todos los tratamientos de
vitrificación. No obstante, los tres tratamientos de vitrificación presentaron mayores valores
(P<0,05) de velocidad rectilínea, linealidad y oscilación que el tratamiento CC post descongelación. Por otro lado, los tratamientos VIT-Sa y VIT-Raf mostraron valores más altos
(P<0,05) de motilidad total y progresiva e integridad de membranas plasmática y acrosomal
en comparación con el tratamiento VIT-Tre después del calentamiento. Finalmente, todos los
tratamientos vitrificación y CC incrementaron (P<0.05) el largo y área de la cabeza de los
espermatozoides después del calentamiento y descongelación respectivamente, comparado
con su referente en fresco. En conclusión, los resultados demostraron que a pesar de que la
congelación convencional produjo una mayor criosupervivencia espermática, la vitrificación
con sacarosa y rafinosa produjeron una mayor motilidad e integridad de membranas
comparadas con la trehalosa, demostrando ser un método atractivo para criopreservar
espermatozoides equinos. |
URI: | http://dspace.ucuenca.edu.ec/handle/123456789/43812 |
metadata.dc.relation.ispartof: | TV;481 |
metadata.dcterms.description: | Médico Veterinario |
Appears in Collections: | Tesis de Pregrado
|