Producción de las proteínas de choque térmico bovinas HSPA1A y HSPA2 en Escherichia coli
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Date
2024-02-06
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Volume Title
Publisher
Universidad de Cuenca
Abstract
Chaperone proteins are responsible for maintaining the quality and functionality of other
proteins. Some chaperones are involved in various functions within reproductive physiology,
such as maintaining the quality and functionality of gametes, among which are chaperones
HSP70 family, which are expressed mainly in response to stressful situations such as heat
shock, oxidative and osmotic stress, among others. Furthermore, members of this family
have also been identified in the plasma membrane of the sperm and decreases in their
expression compromise their motility and quality. In view of this background, this work
focused on the production of recombinant proteins HSPA1A and HSPA2 from bovines (Bos
taurus) for their evaluation as an additive in cryopreservation solutions for embryos and
gametes. As a result, it was only possible to obtain the HSPA1A protein in a bacterial
expression model; with the Escherichia coli (E. coli) Rosetta 2 (DE3) strain, approximately
112 mg of pure protein per liter was obtained, in cultures incubated at a temperature of 37
°C. On the contrary, in production cultures incubated at a temperature of 30 °C, a yield of ± 6
mg of pure protein was achieved. On the other hand, it was not possible to achieve the
production of the HSPA2 protein, as a result of being able to amplify the coding sequence,
so another amplification strategy must be designed and thus be able to obtain the genetic
construction necessary for the generation of the recombinant strain of E. coli capable of
producing this protein.
Resumen
Las proteínas chaperonas son las encargadas de mantener la calidad y funcionalidad de
otras proteínas. Algunas están involucradas en el mantenimiento de la calidad y
funcionalidad de las gametas, entre las cuales se encuentran las chaperonas la familia
HSP70, que se expresan principalmente como respuesta ante situaciones estresantes como
golpes de calor, estrés oxidativo, osmótico, entre otros. Además, miembros de esta familia
también han sido identificadas en la membrana plasmática del espermatozoide y descensos
en su expresión comprometen la motilidad y calidad de los mismos. En vista de estos
antecedentes, este trabajo se enfocó en la producción de las proteínas recombinantes
HSPA1A y HSPA2 de bovinos (Bos taurus) para su evaluación como aditivo en las
soluciones de criopreservación de embriones y gametas. Como resultado, únicamente se
logró obtener la proteína HSPA1A en un modelo de expresión bacteriano, con la cepa de
Escherichia coli (E. coli) Rosetta 2 (DE3) se obtuvo aproximadamente 112 mg de proteína
pura por litro, en los cultivos incubados a una temperatura de 37 °C. Por el contrario, en
cultivos de producción incubados a una temperatura de 30 °C se alcanzó un rendimiento de
± 6 mg de proteína. Por otro lado, no fue posible lograr la producción de la proteína HSPA2,
en consecuencia, de poderse amplificar de la secuencia codificante, por lo que deberá
diseñarse otra estrategia de amplificación y poder así obtener la construcción genética
necesaria para la generación de la cepa recombinante de E. coli capaz de producir esta
proteína.
Keywords
Biología molecular, Biotecnología animal, Reproducción animal, Proteínas
Citation
Código de tesis
TV;480
Código de tesis
Grado Académico
Médico Veterinario