Efecto del KnockOut™ Serum Replacement y del suero fetal bovino en el cultivo y criotolerancia de embriones bovinos producidos in vitro
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Date
2022-10-06
Authors
Journal Title
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Publisher
Universidad de Cuenca
Abstract
The objective of this research was to evaluate the effect of KnockOut™ Serum
Replacement as a substitute for fetal bovine serum in the production and freezing
of bovine embryos produced in vitro. Ovaries were collected postmortem and
transported to the Singamia laboratory where oocyte-cumulus complexes (COCs)
were obtained. The COCs (n=1798) were matured and fertilized in vitro (IVF), and
the presumptive embryos were incubated for 6 days in culture medium
supplemented with 5% KnockOut™ Serum Replacement (KSR; n=589), or 5%
Fetal Bovine Serum (SFB; n=555), or 0.6% bovine serum albumin (BSA; n=654).
On day 7 after IVF, embryos were sorted and quality 1 embryos were frozen and
stored in liquid nitrogen. One group of embryos was thawed and subjected to
fluorescent double staining (propidium iodide and Hoechst) to determine the total
number of blastomeres, and the number of intact and plasma membrane disrupted
blastomeres. Another group of embryos was thawed and incubated for 72 hours to
determine embryo survival at 4, 24, 48 and 72 hours post-thawing. Embryos
cultured with SFB (P=0.0214) and KSR (P=0.0681) produced a higher percentage
of blastocysts and a lower proportion of morulae and early blastocysts than BSA
(P<0.05). From the SFB group, a higher percentage of regular blastocysts was
produced than KSR and BSA. After thawing, embryos cultured with KSR had a
lower number and proportion of altered cells than SFB and BSA (P<0.05). The reexpansion and hatching rate at 4, 24, 24, 48 and 72 hours was significantly lower
in embryos cultured with SFB and KSR than with BSA, with KSR embryos
achieving the lowest survival rate. In conclusion, the addition of KSR or SFB
resulted in a higher proportion of blastocysts and a lower proportion of late stage
embryos than BSA. Although a lower proportion of altered cells was observed in
KSR, this group and SFB experienced lower post-thaw survival rate than BSA.
Resumen
Se propuso como objetivo de esta investigación evaluar el efecto del KnockOut™
Serum Replacement como sustituto del suero fetal bovino en la producción y
congelación de embriones bovinos producidos in vitro. Se recolectaron ovarios
postmortem y se transportaron al laboratorio Singamia donde se obtuvieron los
complejos ovocito-cúmulo (COCs). Los COCs (n=1798) fueron madurados y
fecundados in vitro (FIV), y los presuntos embriones fueron incubados por 6 días
en un medio de cultivo suplementado con 5% de KnockOut™ Serum Replacement
(KSR; n=589), o 5% de Suero Fetal Bovino (SFB; n=555), o 0,6% de albúmina
sérica bovina (BSA; n=654). En el día 7 luego de la FIV, los embriones fueron
clasificados y los de calidad 1 fueron congelados y almacenados en nitrógeno
líquido. Un grupo de embriones fue descongelado y sometido a una doble tinción
fluorescente (yoduro de propidio y Hoechst) para determinar el número total de
blastómeras, y el número de blastómeras intactas y con alteración de la membrana
plasmática. Otro grupo de embriones fue descongelado e incubado por 72 horas
para determinar la sobrevivencia embrionaria a las 4, 24, 48 y 72 horas postdescongelación. Los embriones cultivados con SFB (P=0,0214) y KSR (P=0,0681)
produjeron mayor porcentaje de blastocistos y menor proporción de mórulas y
blastocistos tempranos que BSA (P<0,05). Del grupo SFB se produjo un
porcentaje mayor de blastocistos regulares que KSR y BSA. Luego de la
descongelación los embriones cultivados con KSR tuvieron menor número y
proporción de células alteradas que los SFB y BSA (P<0,05). La tasa de
reexpansión y eclosión a las 4, 24, 48 y 72 horas fue significativamente menor en
los embriones cultivados con SFB y KSR que con BSA, siendo los de KSR los que
lograron menor tasa de sobrevivencia. En conclusión, con la adición de KSR o
SFB se obtuvo mayor proporción de blastocistos y menor proporción de embriones
en estadios tardíos de desarrollo que BSA. Aunque se observó una menor
proporción de células alteradas en KSR, este grupo y SFB experimentaron menor
tasa de sobrevivencia pos-descongelación que BSA.
Keywords
Medicina Veterinaria, Embriones, Bovinos, In vitro
Citation
Código de tesis
Código de tesis
TV;412