Estandarización del método de bioautografía directa como estrategia para la evaluación de extractos naturales como antimicrobianos frente a Escherichia coli y Staphylococcus aureus
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Date
2022-10-12
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Publisher
Universidad de Cuenca
Abstract
Direct bioautography is a fast and simple method that has the advantage of detecting
antimicrobial activity on chromatographic plates, allowing us to directly observe the
fractions showing such activity. The present work consisted of the standardization of the
direct bioautography method, by using both, polar and nonpolar plant extracts, with
antimicrobial activity against Escherichia coli and Staphylococcus aureus. In addition, for
thin layer chromatography (TLC), eluents were used according to the polarity of the plant
extracts, which in turn were also compatible with the antibiotics gentamicin and ampicillin,
used as positive controls. By means of this technique, it was possible to observe the
growth of S. aureus in the TLC plates, however, after several tests, it was not possible to
visualize the E. coli growth, therefore, it was decided to implement the bioautography
method by immersion or coating, obtaining as a result the growth of both, bacteria and
the visualization of the inhibition zones for the antibiotics and certain extracts by means
of the use of MTT and resazurin. However, due to the instability of this method because
of the different variables that must be controlled, the objective of standardizing
bioautography as a tool for evaluating the antibacterial potential of natural extracts was
not achieved.
Resumen
La bioautografía directa es un método rápido y sencillo que presenta como ventaja la
detección de la actividad antimicrobiana sobre placas cromatográficas, permitiéndonos
así observar de una manera directa las fracciones que presentan dicha actividad. El
presente trabajo consistió en la estandarización del método de bioautografía directa
empleando extractos vegetales tanto polares como apolares con actividad
antimicrobiana frente a Escherichia coli y Staphylococcus aureus. Además, para la
cromatografía de capa fina (TLC) se utilizaron eluyentes acordes a la polaridad de los
extractos vegetales, los cuales a su vez también fueron compatibles con los antibióticos
gentamicina y ampicilina, usados como controles. Mediante esta técnica se pudo
observar el crecimiento de S. aureus en las placas de TLC, sin embargo, tras varios
ensayos no se logró visualizar a E. coli, por lo cual, se decidió implementar el método de
bioautografía por inmersión o recubrimiento obteniendo como resultado el
crecimiento de ambas bacterias y la visualización de las zonas de inhibición para los
antibióticos y ciertos extractos mediante el empleo de reveladores como el MTT y la
resazurina. No obstante, debido a la inestabilidad que presenta este método por todas
las variables que deben ser controladas, no se pudo cumplir con el objetivo de
estandarizar la bioautografía como herramienta de evaluación del potencial
antibacteriano de extractos naturales.
Keywords
Bioquímica, Extracto de vegetales, Escherichia coli, Antibióticos
Citation
Código de tesis
Código de tesis
TBQ;833