Evaluación de dos protocolos de congelación de espermatozoides epididimarios en la especie Canis Lupus familiaris
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Date
2021-09-17
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Volume Title
Publisher
Universidad de Cuenca
Abstract
This study was aimed to assess two canine epididymal sperm freezing protocols on
cryosurvival, one conventional (CF) that uses static liquid nitrogen (LN2) vapors, and
another ultra-rapid (UF) that directly plunges drops (30uL) of sperm in LN2. For this
purpose, sixty epididymides from 30 orchiectomized adult dogs were used. The
sperm samples were retrieved by retrograde flushing and then thirty pools were
conformed (3 epididymal samples/pool). Each pool was divided into 2 aliquots that
were cryopreserved with both CF and UF protocols using either 5% glycerol and
250 mM sucrose, respectively, added to the TCG-EY extender (tris, citric acid,
glucose plus 20% egg yolk). The results showed that the UF protocol produced
lower motility (total and progressive) and acrosomal membrane integrity (P < 0.05)
than the CF protocol. However, the kinetic variables (curvilinear and rectilinear
velocities, straightness, linearity, oscillation, the amplitude of lateral head
displacement and beat-cross frequency) and plasma membrane integrity (viability)
did not differ (P > 0.05) between both cryopreserving protocols. Efficiently, the UF
protocol did not vary (P > 0.05) the length, width, area, and perimeter of the sperm
head with respect to the non-frozen values. In conclusion, the UF protocol affects
motility compared to the CF protocol. Despite this, the achievement of kinetics and
viability levels in conjunction with the invariance of the morphometric head
dimensions opens up good expectations for its use in the efficient cryopreservation
of epididymal sperm from domestic and non-domestic canines.
Resumen
Esta investigación evaluó dos protocolos de congelación de espermatozoides
epididimarios caninos sobre la criosupervivencia celular, uno convencional (CC)
que usa vapores de nitrógeno líquido (NL2) estático, y otro ultrarrápido (CU) que
sumerge directamente gotas de esperma (30 L) en NL2. Para este propósito, se
usaron 60 epidídimos de 30 perros adultos orquiectomizados. Las muestras fueron
recuperadas por flujo retrógrado y entonces se conformó 30 agrupaciones (3
muestras epididimarias / agrupación). Cada agrupación fue dividida en 2 alícuotas
que fueron criopreservadas por CC y CU, usando glicerol (5%, v/v) y sacarosa (250
mM), respectivamente, adicionados al diluyente TCG-YH (tris, ácido cítrico, glucosa
+ 20% yema de huevo). Los resultados mostraron que el protocolo CU produjo
menores porcentajes (P < 0,05) de motilidad total y progresiva e integridad de
membrana acrosomal que el protocolo CC. Sin embargo, las variables cinéticas
(velocidades curvilínea y rectilínea, rectitud, linealidad, oscilación, amplitud lateral
de la cabeza y frecuencia de batida de flagelo) e integridad de la membrana
plasmática (viabilidad) no difirieron (P > 0,05) entre ambos métodos de congelación.
Eficientemente, el protocolo de congelación CU no varió (P > 0,05) el largo, ancho,
área y perímetro de la cabeza espermática con respecto a los valores sin congelar.
En conclusión, el protocolo CU afecta la motilidad en comparación con el protocolo
CC, no obstante, el logro de los niveles de cinética y viabilidad junto con el
mantenimiento de las dimensiones morfométricas de la cabeza abre buenas
expectativas para su uso en la criopreservación eficiente de espermatozoides
epididimarios de caninos domésticos y silvestres.
Keywords
Medicina Veterinaria, Criopreservación, Congelación, Genética animal
Citation
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Código de tesis
TV;383