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Title: Sensibilidad analítica de un ensayo de PCR múltiple para la identificación de cepas de campo o vacunales de brucella abortus en leche y nódulos linfáticos de bovinos
Authors: Wampash Paati, Rolando Fabián
metadata.dc.contributor.advisor: Vallecillo Maza, Antonio Javier
Keywords: BRUCELOSIS BOVINA
BRUCELLA ABORTUS
PCR
NODULOS LINFATICOS BOVINOS
Issue Date: 2017
metadata.dc.ucuenca.paginacion: 58 p.
metadata.dc.description.city: 
Cuenca
Series/Report no.: TV;301
metadata.dc.type: bachelorThesis
Abstract: 
Bovine brucellosis is an infectious-transmissible disease caused mainly by Brucella abortus, has a worldwide distribution and a negative socioeconomic effect due to losses caused by abortions, birth of weak calves, reduction in milk production and infertility in infected cattle, and impact in public health because of its zoonotic nature. For the diagnosis different laboratory methods exist, indirect ones such as agglutination with the antigen stained with Rose of Bengal, ring test in milk, ELISAs, among others, and the direct ones like bacterial isolation, direct immunofluorescence and PCR. In the process of implementing a diagnostic test in a laboratory it is necessary to evaluate and estimate its suitability for its concrete application. It evaluates a series of variables, including the minimum amount of analyte that is detected by the test, this value is known as analytical sensitivity. The case of PCR is not the exception, and the current project was intended to estimate the analytical sensitivity of the multiple PCR assay for use in the identification of Brucella abortus field strains and / or vaccine strains S19 and RB51 in the milk samples and bovine lymph node tissues. As a result it was found that, in milk, strain S19 was amplified the product of 456 bp and strain RB51 the product of 1290 bp was amplified and the limit of detection in the two strains was 1 X 104 CFU/ml. In the case of tissues, it has not been possible to estimate the analytical sensitivity, given the inability of the extraction method to obtain the quality genetic material to be used in the PCR assays and the other side, the non-specificity shown by the primers used. So you have to change the method of total DNA extraction and use other primers or redesign them.
Description: 
La brucelosis bovina es una enfermedad infecto-transmisible causada principalmente por Brucella abortus, tiene una distribución mundial y un efecto socioeconómico negativo debido a pérdidas ocasionadas por abortos, nacimiento de terneros débiles, reducción en la producción de leche e infertilidad en bovinos infectados, e impacto en salud pública por su carácter zoonótico. Para el diagnostico existen diferentes métodos laboratoriales, los indirectos como la aglutinación con antígeno teñido con Rosa de Bengala, la prueba de anillo en leche, ELISAs, entre otros, y los directos como el aislamiento bacteriano, Inmunofluorescencia directa y PCR. En el proceso de implementación de un ensayo diagnóstico en un laboratorio es necesario evaluar y estimar su idoneidad para su utilización concreta. Se evalúan una serie de variables, entre ellas la cantidad mínima de análito que se logra detectar por el ensayo, éste valor se conoce como sensibilidad analítica. El caso del PCR no es la excepción, por lo que el presente proyecto se planteó estimar la sensibilidad analítica del ensayo de PCR múltiple para su empleo en la identificación de cepas de campo de Brucella abortus y/o las cepas vacunales S19 y RB51 en muestras de leche y tejidos de nódulos linfáticos de bovinos. Como resultado se encontró que, en leche, la cepa S19 se amplifico un producto de 456 pb y cepa RB51 se amplifico un producto de 1290 pb y el límite de detección en las dos cepas fue de 1 X 104 UFC/ml. En el caso de los tejidos no se logró estimar la sensibilidad analítica, dado la incapacidad del método de extracción para obtener material genético de calidad para ser empleado en los ensayos de PCR y por otro lado, la inespecificidad mostrada por los primers empleados. Por lo que se deberá modificar el método de extracción de ADN total y usar otros primers o rediseñarlos.
metadata.dc.description.degree: 
Médico Veterinario Zootecnista
URI: http://dspace.ucuenca.edu.ec/handle/123456789/28479
Appears in Collections:Tesis de Pregrado

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