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Title: L-carnitine supplementation to UHT skimmed milk-based extender improves motility and membranes integrity of chilled ram sperm up to 96 h
Authors: Galarza Lucero, Diego Andres
Santiago Moreno, Julián
López Sebastián, Antonio
metadata.dc.ucuenca.correspondencia: Galarza Lucero, Diego Andres, dgalarza@ucm.es
Keywords: Lcarnitine
Sperm
Ram
Issue Date: 2019
metadata.dc.ucuenca.volumen: volumen 16, número 3
metadata.dc.source: Animal Reproduction
metadata.dc.identifier.doi: 
metadata.dc.type: ARTÍCULO
Abstract: 
The addition of new additives as L-carnitine (LC) to extenders could mitigate reactive oxygen species (ROS) production and improved motility and viability in chilled ram sperm as has been demonstrated in other species (e.g. human, bull, and mice). The aim of this work was to evaluate the antioxidant effect of LC on motility variables and integrity of plasma, acrosomal, and mitochondrial membranes of chilled (5 ºC) ram sperm up to 96 h. Twelve pools from 36 semen ejaculates were collected by artificial vagina from 12 Merino rams (3-9 years) in four sessions during non-reproductive season (June to August). Each pool was divided into 6 aliquots and then diluted at 200x106 sperm/ml in UHT-based extender (skimmed milk-6% egg yolk) supplemented either 1mM (LC1), 2.5mM (LC2.5), 5mM (LC5), 7.5mM (LC7.5), and 10mM (LC10) of LC. A control group without LC was included in each pool. Sperm motility variables were assessed by CASA system (SCA®) and total sperm with intact plasma membrane / intact acrosome / intact mitochondrial membrane (IPIAIM,%) was assessed by triple fluorescence association test (PI/PNA-FITC/Mitotracker green) at 0, 48, and 96 h. The effects of LC concentration and cold-storage time were analyzed by one-way ANOVA and Bonferroni´s test (p<0.05). Overall, the results showed that kinetic variables and integrity of sperm membranes decreased (p<0.05) as cold-storage time increased in all groups. The results revealed a higher (p<0.01) sperm motility (SM,%) in all LC groups than control group at 48 h. However, at 96 h, both LC5 and LC10 groups showed a SM higher (p<0.001) than both LC7.5 and control group (87.9±2.2 and 88.0±1.8 vs 82.9±2.1 and 82.5±3.1, respectively). Progressive sperm motility (PSM,%) was higher with LC5 group than control group at 48 h (42.2±2.9 vs 36.7±1.8) and 96 h (35.7±3.4 vs 29.0±1.7). Surprisingly, straight line velocity (VSL, μm/s) was improved with all LC groups compared with control group at 0h (p<0.01), 48h (p<0.001) and 96 h (p<0.001). Moreover, at 96h VSL (μm/s) value was higher with LC7.5 group than all LC groups (p<0.5) and control (p<0.001) (LC7.5: 87.2±4.9 vs LC1: 75.1±4.5, LC2.5: 78.6.2±5.9, LC5: 79.4±5.0, LC10: 79.3±5.2, and control: 65.4±3.4). Likewise, IPIAIM percentage was higher (p<0.001) in all LC groups than control group during at 48 h and 96 h (LC1: 62.3±2.0, LC2.5: 66.3±1.7, LC5: 63.3±2.8, LC7.5: 66.5±2.4, and LC10: 66.3±1.9 vs control group: 49.2±2.9). These results revealed a kinetic-enhancer effect of LC supplementation to UHT skimmed milk-based extender, which might improve fertility following cervical insemination of sheep.
Description: 
La adición de nuevos aditivos como L-carnitina (LC) a los diluyentes podría mitigar la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) y mejorar la movilidad y la viabilidad en el esperma de carnero refrigerado como se ha demostrado en otras especies (por ejemplo, humanos, toros y ratones). El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto antioxidante de la LC sobre las variables de motilidad y la integridad de las membranas plasmáticas, acrosómicas y mitocondriales de los espermatozoides refrigerados (5 ºC) de carnero hasta 96 h. Doce piscinas de 36 eyaculaciones de semen fueron recolectadas por vagina artificial de 12 carneros Merino (3-9 años) en cuatro sesiones durante la temporada no reproductiva (junio a agosto). Cada grupo se dividió en 6 alícuotas y luego se diluyó a 200x106 espermatozoides / ml en un diluyente a base de UHT (leche desnatada-yema de huevo al 6%) suplementado 1 mM (LC1), 2.5 mM (LC2.5), 5 mM (LC5), 7.5 mM (LC7.5) y 10mM (LC10) de LC. Se incluyó un grupo de control sin LC en cada grupo. Las variables de motilidad espermática se evaluaron mediante el sistema CASA (SCA®) y el esperma total con membrana plasmática intacta / acrosoma intacto / membrana mitocondrial intacta (IPIAIM,%) se evaluó mediante la prueba de asociación de fluorescencia triple (PI / PNA FITC / Mitotracker green) a 0, 48 y 96 h. Los efectos de la concentración de LC y el tiempo de almacenamiento en frío se analizaron mediante ANOVA de una vía y la prueba de Bonferroni (p <0.05). En general, los resultados mostraron que las variables cinéticas y la integridad de las membranas espermáticas disminuyeron (p <0.05) a medida que aumentó el tiempo de almacenamiento en frío en todos los grupos. Los resultados revelaron una motilidad espermática más alta (p <0.01) (SM,%) en todos los grupos LC que en el grupo control a las 48 h. Sin embargo, a las 96 h, los grupos LC5 y LC10 mostraron un SM más alto (p <0.001) que el grupo LC7.5 y el grupo control (87.9 ± 2.2 y 88.0 ± 1.8 vs 82.9 ± 2.1 y 82.5 ± 3.1, respectivamente). La motilidad espermática progresiva (PSM,%) fue mayor con el grupo LC5 que con el grupo control a las 48 h (42.2 ± 2.9 frente a 36.7 ± 1.8) y 96 h (35.7 ± 3.4 frente a 29.0 ± 1.7). Sorprendentemente, la velocidad en línea recta (VSL, μm / s) mejoró con todos los grupos de LC en comparación con el grupo de control a las 0 h (p <0.01), 48 h (p <0.001) y 96 h (p <0.001). Además, a las 96 h el valor de VSL (μm / s) fue mayor con el grupo LC7.5 que con todos los grupos LC (p <0.5) y control (p <0.001) (LC7.5: 87.2 ± 4.9 vs LC1: 75.1 ± 4.5, LC2 .5: 78.6.2 ± 5.9, LC5: 79.4 ± 5.0, LC10: 79.3 ± 5.2, y control: 65.4 ± 3.4). Asimismo, el porcentaje de IPIAIM fue mayor (p <0.001) en todos los grupos de LC que en el grupo de control durante 48 h y 96 h (LC1: 62.3 ± 2.0, LC2.5: 66.3 ± 1.7, LC5: 63.3 ± 2.8, LC7.5: 66.5 ± 2.4 y LC10: 66.3 ± 1.9 vs grupo de control: 49.2 ± 2.9). Estos resultados revelaron un efecto potenciador cinético de la suplementación con LC al diluyente a base de leche desnatada UHT, que podría mejorar la fertilidad después de la inseminación cervical de las ovejas
URI: http://dspace.ucuenca.edu.ec/handle/123456789/33915
https://www.aete.eu/meeting-2019/program-proceedings/
metadata.dc.ucuenca.urifuente: https://www.animal-reproduction.org/
ISSN: 1806-9614, e 1984-3143
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